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miRNA mimic・S-TuD

miRNA mimic概要

miRNAのguide鎖については天然型RNAとなり、
passenger鎖を不活性化すること
により、成熟miRNAそのものの活性を見ることができます。

miRNA mimic概要

特長

ガイド鎖が強い RNAi 活性を示し、パッセンジャー鎖が RNAi 活性を示さない、ガイド鎖が天然RNA、 パッセンジャー鎖に化学修飾を施した二本鎖RNAをご提供致します。
本製品は、(株)ジーンデザインと(株)サイトパスファインダーの共同研究により得られた成果を基に製品化しております。

製品詳細
  • miRNA mimic 合成法の選択

    • 1.ガイド鎖のみRNAi活性を発揮する
      配列修飾の選択

      ガイド鎖を天然RNA,パッセンジャー鎖に科学修飾を施しさ日本
      鎖RNAを複数合成した。レポーターアッセイを実施し,miRNA
      mimicとしての機能を調べた。日本鎖とも天然RNAであるものや
      いくつかの合成法では,ガイド鎖,パッセンジャー鎖ともにRNAi
      活性を示していた(図1.#7-#10)。ガイド鎖が強い RNAi活性を示し
      、パッセンジャー鎖-が RNAi活性を示さないことを指標に
      miRNA mimic 修飾を選択した。

    • 2. miRNA mimicによるRNAi活性の
      配列修飾の選択

      1.で修飾方法を選択した、miR-1, miR-135 mimicについて濃度
      を変えて固相トランスフェクション方にてH eLa細胞に導入した
      ところ,濃度依存的に RNAi 活性を示した(図2a)。通常のリポソームトランスフェクション法では,0.5 nmという低濃度においても
      RNAi活性を確認できた(図2b)。

    miRNA mimic 合成法の選択

    • 図1.レポーター遺伝子の 3’-UTRにmiRNAのガイド鎖の標的となる配列(Fw target),パッセンジャー鎖の標的となる配列(Rv target), もしくは,標的となる配列がない(without target)プラスミドを用い,レポーターアッセイを実施した。ここでは、一例としてmiR-1 mimic に対するアッセイ結果を示している。ガイド鎖のRNAi活性が高い miRNA mimicを左から並べいる。

    • 図2. a) miRNA mimic を濃度を変えて固相トランスフェクション方により HeLa 細胞に導入し レポーターアッセイを実施した。B)0.5 nM miRNA mimicをリポソーム方により HeLa細胞に導入し,レポーターアッセイを実施した。

  • miRNA mimic 導入による細胞生存への影響(ミニスクリーニング)

    32種のmiRNA mimics について、細胞生存への影響を調べた(図3)。固相トランスフェクションプレートに細胞を播種することによりmiRNA mimic を導入した(図3a)。細胞死を引き起こすsiRNAをコントロールとして用いることで、トランスフェクション条件を決定した。A549 細胞では、1%FBS 存在かにて培養した場合に miR-199a05p,miR-200c-3p,miR-16-5p が生存率を低下させた。これまでに報告されている miRNAが含まれており,選択した合成法が有効であることを示していると考えられる。

    miRNA mimic 導入による細胞生存への影響(ミニスクリーニング)

    図3.miRA mimicのA549細胞の生存率への影響を調べた。固相トランスフェクション(a)により,miRNA mimicを導入後,1% FBS存在下で培養した(b)。

    アッセイ実施機関:株式会社サイトパスファインダー

価格

保証量 価格(税別)
20nmol
簡易カラム精製グレードの場合
¥30,000

※各種蛍光および末端修飾の対応が可能です

納期について

約1週間でお届け致します。

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ご注文・見積り依頼

ご注文からの流れ

miRBaseの登録番号、miRNA名称必要量をお送りください。 ガイド鎖・パッセンジャー鎖の合成アニーリング 約1週間※でお手元にお届け

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